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高考生物酶的应用和生物技术在其他方面的应用特训(2)

文娟分享

  (2)防止血液的凝固

  (3)①将样品中相对分子质量较小的杂质蛋白除去

  ②透析袋能使小分子自由进出,而将大分子保留在袋内

  (4)通过凝胶色谱法将相对分子质量大的杂质蛋白除去

  (5)哺乳动物的成熟红细胞没有细胞核,没有线粒体等由膜构成的细胞器,这样提取的细胞膜相对较纯

  7.(12分)(2014•连云港模拟)在遗传病治疗及刑侦破案中常需要对样品DNA进行分析,PCR技术能快速扩增DNA片段,在几个小时内复制出上百万份的DNA拷贝,有效地解决了因为样品中DNA含量太低而难以对样品进行分析研究的问题。据图回答相关问题:

  a链5′—G—G……T—C—3′ 5′—G—G—OH(引物Ⅰ)

  b链3′—C—C……A—G—5′ ________(引物Ⅱ)

  95℃↓

  5′—G—G……T—C—3′ 3′—C—C……A—G—5′

  55℃↓

  5′—G—G—OH

  5′—G—G……T—C—3′ 3′—C—C……A—G—5′

  72℃↓

  ________   ________

  (1)在相应的横线上写出引物Ⅱ,并在复性这一步骤中将引物Ⅱ置于合适的位置。

  (2)在相应的横线上写出循环一次后生成的DNA分子。

  (3)若将作为原料的四种脱氧核苷酸用32P标记,请分析循环一次后生成的DNA分子的特点:________________,循环n次后生成的DNA分子中不含放射性的单链占总单链的比例为________。

  (4)PCR反应过程的前提条件是________,PCR技术利用DNA的________原理解决了这个问题。

  (5)在对样品DNA进行分析的过程中发现,DNA掺杂着一些组蛋白,要去除这些组蛋白可加入的物质是________________________________________。

  【解析】 (1)DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从3′端延伸DNA链,所以引物就提供了3′端,子链延伸方向为5′→3′,引物Ⅰ与b链部分碱基互补,引物Ⅱ则与a链部分碱基互补,且连接到a链的3′端,故引物Ⅱ的结构为5′—G—A—OH。

  (2)经过一次循环后,产生的两个DNA分子分别含有引物Ⅰ和引物Ⅱ。

  (3)由于作为原料的四种脱氧核苷酸被32P标记,所以新合成的子链均含有放射性,一次循环后的两个DNA各有一条链含32P,若复制n次,共产生DNA单链2n×2,其中只有DNA母链不含32P,则其所占比例为2/(2n•2)=1/2n。

  (4)DNA复制是以两条母链为模板,按照碱基互补配对原则进行的。因此,首先要解旋,使两条母链的碱基暴露出来,才能按照碱基互补配对的原则把相应的碱基一个个地连接起来。DNA分子在80℃~100℃的温度范围内变性,双链解开成单链,当温度慢慢降低时,又能重新结合形成双链。

  (5)利用酶的专一性,应加入蛋白酶,可除去DNA中掺杂的蛋白质。

  【答案】 (1)

  5′—G—A—OH

  HO—A—G—5′ 5′—G—G—OH

  5′—G—G……T—C—3′ 3′—C—C……A—G—5′

  ↓72℃

  (2)

  3′—C—C……A—G—5′ 5′—G—G……T—C—3′

  5′—G—G……T—C—3′ 3′—C—C……A—G—5′

  (3)每个DNA分子各有一条链含32P 1/2n

  (4)DNA解旋 热变性 (5)蛋白酶

  8.(14分)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动,具体步骤如下。

  材料处理:称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份,每份10 g。剪碎后分成两组,一组置于20℃、另一组置于-20℃条件下保存24 h。

  DNA粗提取:

  第一步:将上述材料分别放入研钵中,各加入15 mL研磨液,充分研磨。用两层纱布过滤,取滤液备用。

  第二步:先向6只小烧杯中分别注入10 mL滤液,再加入10 mL体积分数为95%的冷酒精溶液,然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌,使絮状物缠绕在玻璃棒上。

  第三步:取6支试管,分别加入等量的质量浓度为2 mol/L的NaCl溶液溶解上述絮状物。

  DNA检测:在上述试管中各加入4 mL二苯胺试剂,混合均匀后,置于沸水中加热5 min,待试管冷却后比较溶液的颜色深浅,结果如下表。

  材料保存温度 花菜 辣椒 蒜黄

  20℃ ++ + +++

  -20℃ +++ ++ ++++

  注:“+”越多表示蓝色越深

  分析上述实验过程,回答下面的问题。

  (1) 该探究性实验的课题名称是:___________________________________________。

  (2)第二步中“缓缓地”搅拌,这是为了减少________。

  (3)根据实验结果,得出结论并分析。

  ①结论1:与20℃相比,相同实验材料在-20℃条件下保存,DNA的提取量较多。

  结论2:

  ________________________________________________________________________

  ________________________________________________________________________。

  ②针对结论1,请提出合理的解释:________________________________________________________________________

  ________________________________________________________________________。

  (4)氯仿密度大于水,能使蛋白质变性沉淀,与水和DNA均不相溶,且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度,依据氯仿的特性,在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是:________________________________________________________________________

  ________________________________________________________________________,

  然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。

  【解析】 本题主要考查DNA粗提取的相关知识,意在考查实验与探究能力。如果DNA断裂,就不容易被提取出来;温度主要是通过影响酶的活性来影响生理过程;粗提取得到的DNA中含有少量的蛋白质,可以通过氯仿的特殊功能来去除蛋白质,提高DNA纯度。

  【答案】 (1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响

  (2)DNA断裂

  (3)①等质量的不同实验材料,在相同的保存温度下,从蒜黄提取的DNA量最多 ②低温抑制了相关酶的活性,DNA降解速度慢

  (4)将第三步获得的溶液与等量的氯仿充分混合,静置一段时间,吸取上清液
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